進(jìn)口紫外分光光度計(jì)技術(shù)問題指南

 　　進(jìn)口紫外分光光度計(jì)自建立至今已有四十多年的歷史，各種通用型分光光度計(jì)在國(guó)外應(yīng)用已相當(dāng)普遍，但國(guó)產(chǎn)的分光光度計(jì)仍以單波長(zhǎng)法為主。國(guó)內(nèi)有人根據(jù)紫外分光法的基本原理，因陋就簡(jiǎn)，利用普通的分光光度計(jì)建測(cè)定法，即先用某一波長(zhǎng)比色，記錄吸光度，再用另一波長(zhǎng)比色后記錄另一吸光度，然后按紫外分光法進(jìn)行計(jì)算，獲得了較滿意的結(jié)果。近年來，應(yīng)用紫外分光法并結(jié)合后分光技術(shù)的全自動(dòng)生化分析儀已大量引進(jìn)到國(guó)內(nèi)，但除了廠家提供的數(shù)據(jù)外，不少人在進(jìn)口紫外分光光度計(jì)上自行編制試驗(yàn)程序時(shí)對(duì)次波長(zhǎng)選擇的重要性往往認(rèn)識(shí)不足，具有較大的隨意性，由此造成試驗(yàn)結(jié)果誤差還不知原因所在，因此有必要加強(qiáng)對(duì)紫外分光法和后分光技術(shù)的認(rèn)識(shí)。但可以預(yù)見，隨著*儀器的引進(jìn)以及進(jìn)口紫外分光光度計(jì)逐步進(jìn)入市場(chǎng)，這一新技術(shù)必將為越來越多的人所認(rèn)識(shí)和接受，并在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。
　　文獻(xiàn)指出影響進(jìn)口紫外分光光度計(jì)測(cè)定精密度的因素是：光輻射噪聲，電源不穩(wěn)和讀出噪聲，采用強(qiáng)光源可以改善測(cè)定的精密度。當(dāng)試樣中含有干擾物質(zhì)時(shí)，由于雙波長(zhǎng)法減少了樣品的形式誤差，故測(cè)定的精密度優(yōu)于單波長(zhǎng)法。
　　影響進(jìn)口紫外分光光度計(jì)準(zhǔn)確度的因素是：
　?、儆苫瘜W(xué)干擾物引起的誤差，但這種誤差要比單波長(zhǎng)法小得多。
　　②由物理干擾引起的誤差，但可以通過采用較小的雙波長(zhǎng)差等方法來減少誤差，而且這種誤差本身就比單波長(zhǎng)法更小。
　?、塾蓛x器的非理想性如比色杯的性質(zhì)和位置，以及信號(hào)失調(diào)、狹縫過大和雜散光等引起的誤差，其中尤以后者引起的誤差為大，因此要求進(jìn)口紫外分光光度計(jì)的波長(zhǎng)精度在高并且盡量減少雜散光。
　　所謂后分光技術(shù)是相對(duì)傳統(tǒng)的分光光度計(jì)而言的。*，光電比色法賴以建立的Lambert—Beer定律只適用于單色光，單色光純度越高則測(cè)定結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度越好，如果用混合光比色，則溶液的吸光度與液層厚度和溶液濃度間不成比例關(guān)系。因此，傳統(tǒng)的進(jìn)口紫外分光光度計(jì)是以單色器（棱鏡或光柵）對(duì)入射光進(jìn)行分光，然后使特定波長(zhǎng)的單色光通過待測(cè)溶液進(jìn)行比色測(cè)定，而現(xiàn)代生化分析儀上采用所謂后分光技術(shù)的分光光度計(jì)則是直接以光源燈所發(fā)出的混合光透過待測(cè)溶液，經(jīng)溶液吸收后再用全息光柵（Holographic Grating，是目前zui的分光器件，進(jìn)口紫外分光光度計(jì)既可以簡(jiǎn)化光路，又可以減少雜散光，由它色散后投射到二極管矩陣上的光譜焦平面的波長(zhǎng)精度在±2nm以內(nèi)）[6]對(duì)出射光進(jìn)行分光，然后將純度很高的不同波長(zhǎng)的單色光折射到光電二極管矩陣（Photodiode Array）上，由于位置不同，矩陣上的每一個(gè)光電二極管只能接收某個(gè)特定波長(zhǎng)的單色光。有人據(jù)此認(rèn)為這種類型的進(jìn)口紫外分光光度計(jì)只是用某幾個(gè)波長(zhǎng)的濾光板，光不純，波長(zhǎng)精度差，其實(shí)這是一種誤解。這種儀器在編制程序時(shí)（廠家或用戶）已預(yù)先設(shè)定好某項(xiàng)試驗(yàn)選用某個(gè)波長(zhǎng)，儀器工作時(shí)在微機(jī)的控制下只接收所選波長(zhǎng)的光電管上產(chǎn)生的電信號(hào)并將其轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的吸光度。
　　目前的大多數(shù)生化分析儀的二極管矩陣都有7到10個(gè)光電二極管，包含了從340nm～700nm范圍內(nèi)常用的7～10個(gè)測(cè)定波長(zhǎng)[4,5]，有的分析儀甚至多達(dá)16個(gè)波長(zhǎng)。由于現(xiàn)代生化分析儀采用凹面全息光柵為后分光器件，從而取消了斬光器。使進(jìn)口紫外分光光度計(jì)的結(jié)構(gòu)變得相對(duì)簡(jiǎn)單，而且更為關(guān)鍵的是，采用這種結(jié)構(gòu)的后分光技術(shù)使生化分析儀上多頂目同時(shí)測(cè)定變?yōu)楝F(xiàn)實(shí)。否則，如果仍按傳統(tǒng)分光光度計(jì)一樣以單色光進(jìn)行比色測(cè)定，為適應(yīng)不同頂目在短時(shí)間內(nèi)用不同波長(zhǎng)比色的需要，進(jìn)口紫外分光光度計(jì)分光器件必須在幾秒甚至更短的時(shí)間內(nèi)頻繁地變動(dòng)反射鏡的位置，這對(duì)于機(jī)械來說是難以辦到的，即使制成也會(huì)易于損壞而缺乏實(shí)用價(jià)值。后分光技術(shù)的建立使上述問題迎刃而解，而且使雙波長(zhǎng)分光光度法變得更為實(shí)用。