DNA抽提和純化

簡(jiǎn)要描述：DNA抽提和純化主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法。

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DNA抽提和純化主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?；瘜W(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式：酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有；硅質(zhì)材料、陰離子交換樹脂等。

　　DNA抽提和純化總的原則：

　　1、保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；

　　2、核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子；

　　3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到zui低程度。

　　方法介紹：

　　一、酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小為100-150kb

　　二、甲酰胺解聚法：破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。

　　三、玻璃棒纏繞法：用鹽酸胍裂解細(xì)胞，將裂解物鋪于乙醇上，然后用帶鉤或U型玻璃棒在界面輕攪，DAN沉淀液繞于玻棒。生成DNA約80kb。

　　四、異丙醇沉淀法：基本同1法，僅用二倍容積異丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在異丙醇中可溶狀態(tài)）

　　五、表面活性劑快速制備法：用Triton X-100A或NP40表面活性劑破碎細(xì)胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

　　六、加熱法快速制備：加熱96℃-100℃，五分鐘，然后離心后取上清，可用于PCR反應(yīng)。

　　七、堿變性快速制備：先用NaOH作用20分鐘，再加HCI中和，離心后取上清，含少量DNA。